雙光束與單光束紫外分光光度計的光路設(shè)計是兩者最核心的差異,直接決定了測量原理、穩(wěn)定性和效率的不同。以下將分別拆解兩種儀器的光路結(jié)構(gòu)(按 “光的傳播順序” 詳細說明),并通過對比突出關(guān)鍵區(qū)別。
單光束的核心特點是僅有 1 條完整光路,參比溶液和樣品溶液需 “共用同一條光路”,通過 “先測參比、再測樣品” 的分步方式完成測量。其光路結(jié)構(gòu)按順序可拆解為 5 個關(guān)鍵模塊,具體如下:
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光源模塊:提供紫外 - 可見光(通常為氘燈:190-400nm 紫外區(qū);鎢燈:400-1100nm 可見光區(qū),兩燈可手動 / 自動切換)。
- 作用:產(chǎn)生連續(xù)波長的入射光,是光路的 “光信號源頭”。
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單色器模塊:由入射狹縫、準直鏡、色散元件(如光柵 / 棱鏡)、出射狹縫組成。
- 作用:將光源發(fā)出的 “連續(xù)光” 分解為 “單一波長的單色光”(如實驗所需的 260nm、540nm 等特定波長),確保只有目標波長的光進入后續(xù)光路(避免雜光干擾)。
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樣品室模塊:僅含1 個比色皿工位(即一次只能放置 1 個比色皿)。
- 作用:此處是 “參比” 與 “樣品” 的 “分時占位區(qū)”—— 先放入裝參比溶液(如溶劑空白)的比色皿,讓單色光穿過;測量完成后,取出參比皿,再放入裝樣品溶液的比色皿,讓同一波長的單色光再次穿過。
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檢測器模塊:通常為1 個光電轉(zhuǎn)換器(如光電倍增管、硅光電池)。
- 作用:接收穿過 “參比皿” 或 “樣品皿” 后的光信號,將 “光強度信號” 轉(zhuǎn)化為 “電信號”(如電流 / 電壓),并傳輸給數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
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數(shù)據(jù)處理模塊:
- 作用:先記錄 “參比光” 的電信號(作為 “空白基準”,記為I0?),再記錄 “樣品光” 的電信號(記為I),通過公式 A=−lg(I/I0?) 計算樣品的吸光度(A)。
雙光束的核心特點是有 2 條并行的光路(參比光路 + 樣品光路),通過 “分束器” 將單色光一分為二,實現(xiàn) “參比與樣品的同步測量”,其光路結(jié)構(gòu)按順序可拆解為 6 個關(guān)鍵模塊(比單光束多 “分束器” 和 “雙檢測器”):
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光源模塊:與單光束一致(氘燈 + 鎢燈),產(chǎn)生連續(xù)的紫外 - 可見光。
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單色器模塊:與單光束一致(狹縫 + 光柵 / 棱鏡),將連續(xù)光分解為單一波長的單色光 —— 這一步是 “雙光路的共同源頭”,確保后續(xù)兩束光的波長完全相同。
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分束器模塊(雙光束特有):通常為 “半鍍銀反射鏡” 或 “偏振分束器”。
- 作用:將單色器輸出的 “一束單色光” 精準分為兩束強度相等的光:
- 一束為 “參比光”:導向參比池;
- 另一束為 “樣品光”:導向樣品池;
- 關(guān)鍵要求:兩束光的波長、強度必須高度一致(否則會引入額外誤差)。
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樣品室模塊:含2 個獨立的比色皿工位(參比池工位 + 樣品池工位)。
- 作用:兩個工位固定在各自光路中,無需頻繁切換 —— 參比池始終裝 “參比溶液”,樣品池始終裝 “樣品溶液”,兩束光分別同步穿過各自的比色皿(參比光穿參比池,樣品光穿樣品池)。
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檢測器模塊(雙光束特有):配備2 個匹配的光電轉(zhuǎn)換器(如兩個性能一致的光電倍增管)。
- 作用:兩個檢測器 “同步工作”—— 一個接收穿過參比池的 “參比光信號”(轉(zhuǎn)化為電信號I0?),另一個接收穿過樣品池的 “樣品光信號”(轉(zhuǎn)化為電信號I),并同時將兩個電信號傳輸給數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
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數(shù)據(jù)處理模塊:
- 作用:實時對比兩個同步傳輸?shù)碾娦盘枺苯油ㄟ^公式 A=−lg(I/I0?) 計算樣品吸光度。
- 核心優(yōu)勢:若光源波動(如亮度漂移)、環(huán)境干擾(如溫度變化),會同時影響兩束光的信號(I0?和I同比例變化),計算差值時干擾會自動抵消,大幅降低誤差。